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犬ELISA试剂盒实验不同样本的处理

人阅读 发布时间:2024-01-24 09:37

      通常我们可用于犬ELISA试剂盒检测的样本是有多种类型的,如血清、血浆、尿液、细胞培养上清或组织匀浆液等,不同类型的检测样本前期的处理方法是不一样的。正确的处理样本是保证犬ELISA试剂盒检测的正确性和准确性的第一步。
犬ELISA试剂盒
不同类型的样本的处理方法:
1.血清
血清是常用于犬ELISA试剂盒检测的一类样本,处理也比较简单。用无热原、无内毒素的试管或离心管采集血液标本,将试管或离心管室温放置2小时或4℃过夜,使血清析出。(最好将试管或离心管倾斜放置,使液面横截面增大,能使血清更大程度的析出。4℃1000×g离心20min,仔细收集上清。建议将血清分装多份,-20℃或-80℃保存,避免反复冻融。采血过程中应避免溶血,因为红细胞裂解时会释放具有过氧化酶活性的物质,在以HRP为标记的犬ELISA试剂盒检测中会有非特异性的显色,而导致检测的不准确性。同时也应避免细菌污染,因为菌体内可能含有内源性的HRP从而导致检测的假阳性。
2.血浆用含抗凝剂的采血管或离心管采集血液标本,标本采集后30min内4℃1000×g离心15min,取上清即血浆。将上清分装多份,-20℃或-80℃保存,避免反复冻融。避免使用溶血或高血脂的标本。常用的抗凝剂为EDTA等,检测时还应仔细阅读犬ELISA试剂盒说明书,检查犬ELISA试剂盒是否对抗凝剂有特殊要求。
3.细胞培养上清取细胞培养上清到离心管,1000×g离心20min,除去细胞碎片及杂质,取上清,-20℃或-80℃保存,避免反复冻融。
4.组织匀浆液
(1) 将组织样本用PBS (0.01M, PH 7.4) 冲洗,洗去组织表面残留的血液或杂质。
(2) 将组织块称重,记录后剪碎,碎块应尽量小,便于匀浆得更充分。
(3) 将组织按一定的比例加入预冷的PBS(临用前加入蛋白酶抑制剂)匀浆,匀浆时置于冰上或冰浴中。(通常按组织重量:PBS体积=1:9的比例匀浆,例如1g的组织样本对应9mL的PBS,具体体积可根据实验需要适当调整,犬ELISA试剂盒检测后计算样品浓度时应乘以相应的稀释倍数)。
(4) 吸取匀浆液到离心管,4℃5000×g 离心5~10min,取上清,-20℃或-80℃保存,避免反复冻融。尿液、唾液等其他液体生物样本1000×g离心20min,取上清即可检测。总的来说,因为犬ELISA试剂盒只能检测可溶性蛋白的含量,所以应保证所有样本均为澄清的液体,沉淀或悬浮物都应离心去除。为了保证检测的准确性,保存于-20℃或-80℃的样本最好在1~6个月内检测;4℃保存的样本应在1周内进行检测。另外,还应保证样本不含NaN3,因为NaN3会抑制HRP的活性,从而导致假阴性的结果。

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