上海机纯生物大鼠白细胞介素17F(L-17F)试剂盒操作步骤详细介绍

上海机纯生物大鼠白细胞介素17F(L-17F)试剂盒操作步骤详细介绍

[说明]
1.由于现有条件及科学技术水平尚不能对所有供货商提供的所有原料进行全面的鉴定与分析，本产品可能存在
一定的质量技术风险。
2终的实验结果与试剂的有效性、实验者的相关操作以及当时的实验环境密切相关，请务必准备充足的标本备
份。
3.不同批次的同一产品可能会有少许差别，如：检测限、灵敏度以及显色时间等，请依据试剂盒内说明书进行
实验操作，网站电子版说明书仅作参考。
4只有全部使用本试剂盒配套试剂才能保证检测效果，不能混用其他制造商的产品。只有严格遵守本试剂盒的
实验说明才会得到佳的检测结果。
5.本公司只对试剂盒本身负责，不对因使用该试剂盒所造成的样本消耗负责，请使用者使用前充分考虑到样本
的可能使用量，预留充足的样本。
6.使用化学裂解液制备的组织匀浆或细胞提取液可能会由于某些化学物质的引I入导致ELISA实验结果偏差。
7.若样本为细胞培养上清，因该类样本干扰因素较多，如：细胞状态、细胞数量、采样时问等，所以可能存在
检测不出的情况。
8.某些天然蛋白或重组蛋白，包括原核及真核重组蛋白，可能因为与本产品所使用的检测抗体及捕获抗体不匹
配，而不被检测出。
【实验原理]
试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被大鼠白细胞介素17F(IL-17F）捕获抗
体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底先涤。用底物TMB显色，
TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的。颜色的深浅和样品中的大鼠白细胞介素
17F(IL-17F）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
[样本处理及要求
1.血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃C过夜，然后1000×g离心20分钟，取上清即
可，或将上清置于-20°℃C或-80℃保存，但应避免反复冻融。
2.血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃C1000×g离心15分钟，取
上清即可检测，或将上洁置干20℃或80℃保存，但应避免反复冻融。
3.组织匀浆：用预冷的PBS(0.01M，pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结
果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应
9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆
器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。后将匀浆液于
5000×g离心5~10分钟，取上清检测。
4.细胞培养物上清或其它生物标本：请1000×g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃C保
存，但应避免反复冻融。
注：标本溶血会影响后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。
[需要而未提供的试剂和器材]
1.酶标仪（450nm)
2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3.37°℃恒温箱
4.蒸馏水或去离子水
[操作步骤]
1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2．设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；
3.样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。
4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（(HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住
反应孔，37℃C水浴锅或恒温箱温育60min。
5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满先涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复
洗板5次（也可用洗板机洗板）。
6.每加入底物A、B各50μL，37℃C避光孵育15min。
7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。
【实验结果计算]
以所测标准品的OD值为横坐标，标准品的浓度值为纵坐标，在坐标纸上或用相关软件绘制标准曲线，并得到直
线回归方程，将样品的OD值代入方程，计算出样品的浓度。
【试剂盒性能
1.检测范围：1.5 pg/mL-48 pg/mL。
2.灵敏度：低检测浓度小于0.1 pg/mL。
3.特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
4.重复性：板内变异系数小于10%，板间变异系数小于15%。
上海机纯生物以诚信为本，努力打造的品牌，为您提供大鼠白细胞介素17F(L-17F)试剂盒售中、售前、售后服务，具有的技术团队，把产品引入国内市场，满足国内广大客户的需求，在二十一世纪生命科学蓬勃发展的时代，将紧跟生命科学的发展动态，为广大科研学者探索生命的奥秘而奉献绵薄之力！